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細胞計數(shù)儀計量校準是生物領域中廣泛應用的實驗工具,它可用于細胞濃度、細胞大小、體積等方面的分析。根據(jù)實驗需要,細胞計數(shù)器需要進行校準以確保測量的準確性和可靠性。
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基于顯微圖像的圖像識別法,通常通過臺盼藍染色或AO/PI等熒光染料染色,整合先進的光學成像技術和智能圖像識別技術,進行自動細胞計數(shù)檢測。臺盼藍是細胞活性染料,常用于檢測細胞膜的完整性,以檢測細胞是否存活。活細胞的細胞膜完整,能排斥臺盼藍,不會被染成藍色;而死細胞由于細胞膜破損或不完整,會被臺盼藍染成藍色,因此可借助臺盼藍染色進行細胞計數(shù),區(qū)分死活細胞。吖啶橙(AO)和碘化丙啶(PI)是可以與細胞核內(nèi)雙鏈DNA結合的熒光染料。
AO可以自由穿透細胞膜,嵌入所有細胞(活細胞和死細胞)的細胞核中發(fā)出綠色熒光;PI只能通過破損的細胞膜,即死細胞的細胞膜,嵌入死細胞的細胞核中發(fā)出紅色熒光。當兩種染料同時存在于死細胞核中時,會發(fā)生熒光共振能量轉移,從而導致死細胞發(fā)出紅色熒光。因此可通過AO/PI準確區(qū)分死活細胞,進行準確細胞計數(shù)。
細胞計數(shù)儀計量校準以下校準項目應在細胞計數(shù)儀經(jīng)過開機預熱、儀器達到正常工作條件后進行,校準前應當確保儀器工作狀態(tài)正常,參照附錄 A 進行校準原始數(shù)據(jù)記錄。
1 外觀要求用目視并配合手動操作進行檢查。儀器外表應光滑平整,不應有影響工作性能的機械損傷;顯示屏表面應平整潔凈無劃痕,讀數(shù)清晰;開關及按鍵功能良好。儀器應有以下標識:名稱、型號、編號、生產(chǎn)廠家、出廠日期。
2 測試前準備開啟儀器,參照儀器使用說明書,使儀器達到最佳工作條件。根據(jù)客戶使用要求、被校準儀器的日常工作模式和選取的標準物質(zhì)類型選取合適的細胞測量模式。
3 空白值 JJF xxxx-xxxx 7取空白稀釋液、純水或蒸餾水進行上樣計數(shù),測量 4 次,記錄測量值并取其中的最高值作為空白值。
4 示值誤差儀器的示值誤差以細胞濃度(總細胞濃度、活細胞濃度和死細胞濃度)標準物質(zhì)、細胞活率標準物質(zhì)、顆粒直徑標準物質(zhì)測量值與標準值的誤差表示。根據(jù)被校準儀器的日常工作模式選取合適濃度、比例和顆粒直徑的標準物質(zhì),使用標準物質(zhì)前上下顛倒 30-50 次左右從而保證充分混勻(瓶底無沉積物)。用移液器從充分混勻的標準物質(zhì)樣本液體中間層吸取液體進行上樣計數(shù),測量 5 次,記錄測量值,并按照公式(1)進行示值誤差計算。CiCs(1)式中:—細胞計數(shù)器示值誤差,/mL、%或 μm; Ci—5 次測量值的平值,/mL、%或 μmCs—標準值,/mL、%或 μm。
5 測量重復性儀器重復性以細胞濃度(總細胞濃度、活細胞濃度和死細胞濃度)標準物質(zhì)、細胞活率標準物質(zhì)、顆粒直徑標準物質(zhì) 10 次測量值的實驗標準偏差表示。根據(jù)被校準儀器的日常工作模式選取合適濃度、比例和顆粒直徑的標準物質(zhì),使用標準物質(zhì)前上下顛倒 30-50 次左右從而保證充分混勻(瓶底無沉積物)。用移液器從充分混勻的標準物質(zhì)樣本液體中間層吸取液體進行上樣計數(shù),測量 10 次,記錄測量值,并按照公式
(1)進行示值誤差計算。1( )21nC CSTDnii i
(2)式中:STD-測量值的標準偏差,/mL、%或 μm; n—測量次數(shù); JJF xxxx-xxxx 8 Ci —第 i 次測量值,/mL、%或 μm; Ci —測量平均值,/mL、%或 μm。8 校準結果表達經(jīng)校準后的細胞計數(shù)儀應填發(fā)校準證書,校準證書應符合 JJF1071-2010 中5.12 的要求,參照附錄 C 給出校準項目名稱、測量值以及擴展不確定度。9 復校時間間隔送校單位可根據(jù)實際情況自主決定細胞計數(shù)儀的復校時間間隔,建議不超過1 年。
公司背景介紹:
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我們在服務上與其它單位密切合作,包括強檢、特檢或做不了的都幫客戶代送代取,省時、省力、方便客戶。
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